通常包括以下几个步骤:
1、选择合适的血清
在进行胎牛血清替换之前,需要根据细胞类型和实验需求选择适合的血清。例如,有些细胞对特定品牌的血清有适应性,因此在更换时应尽量选择相同品牌的血清以避免细胞生长速度下降或状态不佳。
2、逐步替换
为了减少细胞因环境变化而产生的应激反应,建议采用逐步替换的方法。具体操作是将新旧血清按比例混合,逐步增加新血清的比例,直到完全替换为新血清。例如,可以按照新血清与旧血清1:3、1:1、3:1的比例逐步替换。
建议如下替换方法:
(1)培养液配制过程中先用25%新血清与75%原血清进行混合,培养传代1-2次;
(2)而后用50%新血清与50%原血清混合培养传代;
(3)再用75%新血清与25%原血清混合培养传代;
(4)最后使用新血清培养传代。
3、观察细胞状态
在替换过程中,需要密切观察细胞的状态。如果发现细胞生长缓慢或状态不佳,可能需要调整替换方案或重新评估所选血清的适用性。
4、注意事项
在进行胎牛血清替换时,还需注意以下几点:
Ø 确保新旧血清的质量和品质一致。
Ø 避免反复冻融,以防止血清中的蛋白质变性。
Ø 在细胞处于对数生长期时进行替换,以维持较高的细胞密度。