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使用血清时,你可能遇到过这些问题~
作者:admin 发布日期:2019/3/11 8:50:15

1、 如何储存和解冻血清不会使血清品质受损?


将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃使之融解,然后在室温下使之全融。

但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。

因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融若存放于4℃时,请勿超过1个月。

若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。


2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?


沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响品质。

如要除去沉淀,离心(400g,1-2分钟)或让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一无菌瓶中(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。

所以,使用时摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。


3、如何选择适合的血清?


国内一致认为HYCLONE的血清是最好的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。所以,我一般会从直销员那里买血清,有的国外生物公司由于刚刚进入中国,知名度不高,但是其实在国外已经做得很不错了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。


4、 如何避免血清中产生沉淀?


如下操作可避免沉淀的产生:

(1) 解冻血清时,请随一边解冻,一边摇匀,使温度及成分均一,减少沉淀产生。

(2) 血清分装冻存时,规则摇均(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,易使蛋白质凝结而发生沉淀。

(4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清品质。

(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,无须做此步骤。

(6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且一边热灭火,一边摇匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。


5、 培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?


一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。

因为抗生素和血清中的一些成分在解冻后就开始降解。


6、为什么要热灭活血清?


加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。

在免疫学研究,培养ES细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。


7、有必要做热灭活吗?


热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。

经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。

而经热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!


8、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?


一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊。

然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。

如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:

(1) 细胞生长过老,破碎的细胞残骸;

(2) 血清质量不好,反复冻融的结果;

(3) 配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;

(4) 配制培养基的水质、容器不合格。可用离心、过滤的方法去除这些黑点;

(5) 培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。


9、 细胞培养中如何防止黑点生成?


(1) 尽可能地减少血清冻融次数。

(2) 培养基无需37℃水浴。

(3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。

(4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。

(5) 掌握细胞传代的最佳时机,细胞切勿生长过老。


10、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?


来源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum,CS)采自出生10至14 天的小牛。

各成分占比不同:两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。

血清保存和使用须注意:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时 ,应先将血清至于2-8℃,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。

此文关键字: 血清